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Revista Panamericana de Salud Pública

Print version ISSN 1020-4989

Rev Panam Salud Publica vol.19 n.4 Washington Apr. 2006

http://dx.doi.org/10.1590/S1020-49892006000400009 

INSTANTÁNEAS

 

Uso de la reacción en cadena de la polimerasa para identificar aislamientos de Streptococcus pneumoniae resistentes a la penicilina

 

 

La infección por Streptococcus pneumoniae es la más frecuente de las adquiridas en la comunidad y está asociada con alrededor de 3–5 millones de muertes al año en el mundo. La resistencia de este microorganismo a la penicilina ha aumentado mucho en los últimos años y se ha encontrado hasta en 78% de los aislamientos en algunos países. La resistencia a antimicrobianos betalactámicos se debe exclusivamente a alteraciones en los genes bacterianos que codifican la proteína de unión a la penicilina (PUP) —el blanco natural de estos antibióticos—, de manera que al reducir su afinidad de unión la hace resistente a estos productos.

En este artículo se demuestra la aplicabilidad clínica de la reacción en cadena de la polimerasa (RCP) para detectar tempranamente la resistencia de S. pneumoniae a los antibióticos. Para ello se analizaron 153 aislamientos clínicos de esta bacteria aportados por varios hospitales del estado de Porto Alegre, Brasil.

A las muestras se les midió la concentración mínima inhibidora (CMI) de penicilina mediante la prueba de dilución en agar Mueller-Hinton con 5% de sangre de carnero desfibrinada. Se consideraron susceptibles las cepas con una CMI < 0,06 µg/mL, con resistencia intermedia cuando la CMI estaba entre 0,12 y 1,0 µg/mL y con alta resistencia cuando la CMI > 2,0 µg/mL. Como control se empleó la cepa de S. pneumoniae ATCC 49619. Simultáneamente se realizó un análisis por RCP para detectar el gen lytA en la cepa aislada y se buscaron amplicones de tallas determinadas 1a, 2b y 2x mediante cebadores específicos para los genes de la PUP.

Los resultados demostraron que la resistencia de S. pneumoniae a la penicilina en el sur de Brasil ha aumentado, aunque aún es menor que la observada en otros países. La tasa de cepas resistentes a la penicilina en Porto Alegre fue de 22,8% (16,3% con resistencia intermedia y 6,5% con resistencia alta). Una proporción estadísticamente significativa de las muestras susceptibles a la penicilina no tenían amplicones (P = 0,05), 84% de las muestras con resistencia intermedia tenían solo uno (por lo general el 2x) y las cepas altamente resistentes tenían los tres amplicones investigados.

La presencia de amplicones 2x de la PUP en la mayoría de las cepas de S. pneumoniae con resistencia intermedia a la penicilina indica que estos pueden servir de marcadores de poca resistencia. Sin embargo, no se logró diferenciar las muestras con resistencia intermedia a la penicilina de las que tenían una elevada resistencia mediante la presencia o ausencia de amplicones 2x del gen de la PUP, aunque la presencia simultánea de dos o tres amplicones diferentes se asoció significativamente con la expresión de una alta resistencia.

El diagnóstico molecular de la resistencia a la penicilina se dificulta debido a la asociación de múltiples PUP con el desarrollo de la resistencia. Sin embargo, este estudio demostró que mediante la RCP se pueden detectar tempranamente las cepas de S. pneumoniae con resistencia a antimicrobianos. Esta técnica es rápida y fácil de realizar en laboratorios habilitados para ello. Es necesario diseñar nuevos estudios que permitan determinar cuál de los PUP puede servir mejor de blanco en la RCP, de manera que permita detectar las cepas de neumococos resistentes a antibióticos betalactámicos. (Walker Zettler E, et al. Determination of penicillin resistance in Streptococcus pneumoniae isolates from southern Brazil by PCR. Int J Infect Dis. 2006;10(2):110–5.)